Как выглядит справка пцр

Процедура диагностики инфекционных процессов с помощью метода ПЦР сегодня очень актуальна. Среди ее преимуществ следует отметить обнаружение инфекционных агентов без наличия характерных симптомов заболевания, готовность результатов уже через четыре часа после процедуры, максимальную чувствительность к возбудителям заболеваний (демонстрирует положительный результат даже при наличии всего нескольких молекул ДНК патогенной клетки).

Ошибочные и ложные реакции практически исключены, а кроме того анализ позволяет выявить РНК или ДНК инфекционного агента.

На данный момент диагностическая методика проходит активные этапы усовершенствования, появляются новые разновидности ПЦР.

Принцип ПЦР

Процедура диагностики проводится только в лабораторных условиях и базируется на многократном удвоении определённого участка ДНК и РНК при помощи ферментов в искусственных условиях. В результате нарабатываются количества ДНК и РНК, достаточные для визуальной детекции. При этом происходит копирование только того участка, который удовлетворяет заданным условиям, и только в том случае, если он присутствует в исследуемом образце.

Каждая лаборатория, работающая с этим методом диагностики, обладает специальной базой данных, которая позволяет точно определить наличие того или иного инфекционного агента.

Количество лабораторий, которые предлагают подобного рода методику, с каждым днем увеличивается, что позволяет диагностировать каждого желающего. Метод ПЦР позволяет не только определить наличие возбудителя, но и максимально точно подсчитать его количественное соотношение.

Кроме увеличения числа копий ДНК и РНК, ПЦР позволяет производить другие манипуляции с генетическим материалом: введение мутаций, сращивание определенных фрагментов ДНК и широко используется в биологической и медицинской практике, например, для установления отцовства, клонирования генов и выделения новых генов.

Инфекции, которые можно выявить посредством ПЦР-анализа

ПЦР-анализ активно используют гинекологи, онкологи, гастроэнтерологи, фтизиатры, пульмонологи и др. Анализ ПЦР позволяет выявить возбудителей следующих инфекционных процессов:

• инфекции хеликобактер пилори;
• кандидозные инфекции; и его онкогенные подвиды;
• инфекции, которые передаются половым путем; ;
• герпес первого и второго типа, гепатиты;
• микобактерии туберкулеза;
• вирус Эпштейн-Барра;
• цитомегаловирус (ЦМВ);
• вирус герпеса человека (ВГЧ) 6 типа;
• коронавирус COVID-19.

И это лишь основная часть инфекций, которые можно определить посредством использования ПЦР-анализа.

Правила и алгоритм проведения забора материала для анализа

Для того, чтобы определить у пациента наличие инфекции, которая передается через половой контакт, берут на исследование мазок/соскоб из половых органов или урину. В случае, если исследование производится с целью определения инфекционных заболеваний, таких как гепатит, герпес, ВИЧ и т.д., используется венозная кровь пациента. Для исследования на наличие мононуклеоза (вируса Эпштейн-Барра) используется мазок из ротовой полости.

Иногда для анализа необходима спинномозговая жидкость – она позволяет определить причину появления определенных неврологических заболеваний. Если же у новорожденного ребенка есть подозрение на наличие внутриутробного инфицирования, для исследования берут кусочек плаценты и пробу околоплодных вод. Для теста на коронавирус Covid-19 берется мазок из носа и зева на определение РНК вируса SARS-CoV-2.

Результаты проведения диагностики максимально достоверны, и ошибка практически исключена. Достоверность процедуры напрямую зависит от того, насколько правильно были взяты материалы для проведения анализа.

Среди самых важных рекомендаций перед сдачей материала на анализ стоит отметить то, что моча собирается в утреннее время в специальный стерильный контейнер, кровь сдают утром натощак. Кроме того, за 24 часа до процедуры запрещается вступать в половой контакт, а перед сдачей мазка необходимо за два часа провести акт мочеиспускания. Женщинам за двое суток до процедуры нужно отказаться от спринцевания и введения суппозиторий во влагалище.

Результаты анализа могут быть готовы как за четыре часа, так и за двое суток, все напрямую зависит от диагностируемого заболевания и качества взятого на анализ материала.

Расшифровка результатов

Результат может оказаться как отрицательным, так и положительным. Отрицательный ответ демонстрирует что во взятом на анализ образце не обнаружено исследуемых патогенных клеток инфекционного типа. Положительный анализ указывает на наличие в предоставленном для анализа образце инфекционных агентов.

При позитивном результате анализа необходимо максимально быстро подобрать эффективное и качественное лечение.

Положительный результат без наличия симптоматики заболевания является показателем ранней стадии развития заболевания либо того, что пациент является носителем инфекции. В отношении к носителям медикаментозная терапия не применяется, но регулярно проводятся контрольные анализы для отслеживания динамики. Среди таких заболеваний – герпес и папилломавирусная инфекция.

Если пациент является носителем инфекционного заболевания – он подвергает опасности всех окружающих, следовательно, рекомендуется проводить терапию, которая будет блокировать распространение инфекции.

В результатах указываются также количественные характеристики патогенных клеток, основываясь на которых врач определяет активность заболевания и подбирает максимально эффективный терапевтический курс. Среди самых важных характеристик анализа ПЦР на 12 инфекций стоит отметить: чувствительность, специфичность и точность.

Больше свежей и актуальной информации о здоровье на нашем канале в Telegram. Подписывайтесь: https://t.me/foodandhealthru

Специальность: врач педиатр, инфекционист, аллерголог-иммунолог .

Когда сдавать ПЦР-тест и как выглядит справка

ПЦР-тест — это международный стандарт, который позволяет быстро выявить наличие/отсутствие в организме вируса. В каждой стране приняты свои стандарты тестирования, но существуют и общие правила. Так, для въезда в Шенгенскую зону на руках у туриста должен быть отрицательный ПЦР-тест, который сделан за 72 часа до прохождения границы.

Тестирование проводится в сертифицированных центрах, для проверки берутся мазки из носа и рта.

Если вы внимательно изучаете расписание автобусных рейсов в Германию и планируете в обозримом будущем поездку, есть смысл узнать, где вы сможете сдать тест на коронавирус и получить официальную справку. Сама справка выписывается на английском языке, и лучше иметь на руках оригинал с «синей» печатью: в некоторых странах копия считается недействительной.

ПЦР-тест при въезде в Германию

Если вы собираетесь в Германию, необходимо уточнить несколько моментов:

• входите ли вы в категорию граждан, которым разрешен выезд из РФ;
• сможете ли вы пересечь границу в Германию;
• как и когда сдать ПЦР-тест.

Это важно: наличие прививки не избавляет от необходимости сдавать тест, поскольку вакцина «Спутник V» не признается на территории Европы. При перемещении по России вам было бы не нужно сдавать ПЦР-тест, но при въезде в страну Шенгенской группы эта проверка будет обязательной.

Где сдать ПЦР-тест

К вашим услугам частные медицинские учреждения и лаборатории. Подобная услуга высоко востребована, поэтому в каждом городе есть множество клиник, где вы быстро сдадите тест. Стандартный срок подготовки такого документа — один-два дня, но можно получить справку быстрее, если заранее обговорить этот момент при оплате услуги в клинике.

В крупных городах центры тестирования открыты в аэропортах: в такой лаборатории результат будет готов через несколько часов.

Чтобы беспрепятственно пересечь границу с Германией на автобусе, нужно помимо ПЦР-теста иметь основания для въезда. Чтобы узнать, каким категориям граждан можно в сентябре 2021 года пересекать Шенгенскую зону, изучите предыдущую нашу статью или свяжитесь с менеджером «Балтик Экспресс Сервис» по телефону.

Программы реабилитации после коронавирусной инфекции

Положительный ПЦР на коронавирус свидетельствует о наличии клеток SARS-CoV-2 (РНК) в организме и показывает вероятную стадию заболевания. Рассмотрим подробнее методы обнаружения КОВИД-19.

Исследования доказали, что его концентрация значительно повышается при ковидном заболевании. У 73% пациентов уровень CRP оказался больше нормы. Такие показатели наблюдались при тяжелой и легкой форме течении инфекции.

Анализ можно делать уже в первые дни заражения, потому что концентрация С-реактивного белка повышается спустя 6–8 часов от момента инфицирования.

Специфическая

Среди таких методов диагностики чаще всего используются два вида.

Экспресс-тесты

Дают возможность узнать, выработался ли у человека иммунитет к вирусу. Для этого проводятся исследования на наличие двух антител: G и M. Если результат такого иммунохроматографического (ИХГ) теста положительный, это свидетельствует о том, что заболевание в организме протекает уже больше недели.

ИХГ анализ помогает быстро выявить даже бессимптомный коронавирус. Кроме того, можно оценить уровень иммунной защиты организма.

Отличие экспресс-тестов от обыкновенных не только в быстром результате, но и в месте проведения. Делаются такие не в специальной лаборатории, а локально. Берется кровь из пальца либо из вены.

Это очень удобно, если необходимо протестировать много людей вне медицинского учреждения. Например, летом 2020 года власти Германии решили бесплатно тестировать таким методом иностранных туристов, которые прибывали в аэропорт.

Особенно важно провериться на наличие антител IgG и IgM тем категориям населения, которые контактируют со множеством людей и находятся в группе риска.

ПЦР тест

Этот вид диагностики коронавируса признан лучшим из-за надежности. Она составляет 99%. Такой тест не только помогает обнаружить носителя инфекции, но и вовремя выявить контактирующих.

В 1993 году автор методики полимеразной цепной реакции, Кэри Мюлис, получил Нобелевскую премию по химии. Ее суть в том, что берется фрагмент ДНК в малой концентрации и значительно искусственно увеличивается при помощи ферментов.

PCR считается самым чувствительным, потому что определяет наличие возбудителя и его количество, даже когда содержание минимальное. Анализ этим методом особенно актуальный при бессимптомном течении заболевания.

Сдавая ПЦР тест, можно получить еще несколько преимуществ:

• проверить на генетическом уровне собственное здоровье;
• выявить вирус на ранней стадии;
• обнаружить другие вредоносные микроорганизмы.

В основе PCR диагностики – технология инвитро (in vitro). Эта методика позволяет проводить эксперимент вне живого организма – в пробирке.

Подготовка к тесту на коронавирус методом ПЦР

PCR диагностика обычно проводится утром. Желательно сразу после сна. Чем точнее выполняются предписания, тем достовернее получается результат анализа.

Чтобы правильно сдать ПЦР на ковид, необходимо заранее подготовиться:

За 3-4 часа до прохождения исключить:

• прием еды, напитков;
• жевание резинки;
• использование капель в нос, солевых растворов и спреев;
• курение;
• чистку зубов;
• полоскание рта и горла.

Если мучает сильная жажда, то разрешается сделать всего несколько глотков обыкновенной воды не менее, чем за 30 минут до взятия мазков.

За 12 часов до сдачи исключить:

• леденцы для рассасывания;
• антисептики для полости рта;
• аэрозоли для горла.

За 1 сутки до тестирования отказаться от:

• употребления спиртных напитков, даже легких;
• приема антибиотиков.

ПРЦ диагностика ковида может показать один из двух результатов:

При нем в тестах указывается несколько значений:

Чтобы получить расшифровку, необходимо в бланке найти строку «РНК SARS-CoV-2». Рядом с записью указано, обнаружен вирус или нет.

Ложноположительные и ложноотрицательные результаты ПЦР

Диагностика, лечение, вакцинация COVID-19

Вирусолог из Берлина, Кристиан Дростен, заметил сходство между тестированием этим методом и рыбалкой в домашних условиях. Если в аквариуме плавает карасик, но сачок пуст при попытке его выловить, это не значит, что в емкости никого нет.

То же самое можно сказать и про попытки выявить вирус в человеческом теле. Не обнаружив ковид19, нельзя утверждать, что потенциальный больной не инфицирован.

По данным азиатских исследователей, доля ложноотрицательных результатов ПЦР-тестов составляет от 40 до 60%. Это происходит потому, что вирус временно располагается в ротоглотке, откуда берется мазок для анализа, но не живет в ней. На момент диагностики инфекции может уже не быть в слизистой верхних дыхательных путей, если это не первые дни заражения.

Истинный результат при такой методике можно получить из мокроты пациента. Но ситуация усложняется тем, что кашель при коронавирусе чаще всего сухой. Поэтому при взятии биоматериала со слизистой даже качественные тест-системы могут не справиться, показав ложный результат.

Случаев, когда РНК обнаруживалась у совершенно здоровых людей, намного больше.

Причины искаженных данных ПЦР-тестов:

1. Халатность со стороны людей, участвовавших в исследовании (курьеров, секретарей, специалистов). Например, несоблюдение температурного режима в месте, где хранились образцы для анализа, их размораживание при транспортировке. Также играет роль человеческий фактор. При взятии мазка можно перепутать пробу или ввести результат не в ту ячейку.
2. Наличие нежизнеспособных клеток коронавируса у переболевшего. Когда ковид погибает, в организме человека еще имеется его генетический код. PCR обладает высокой чувствительностью, поэтому может выявиться повышение показателей.
3. Неправильная подготовка со стороны пациента к прохождению теста.

КАК УСТРОЕН МЕТОД ПЦР?

ПЦР (полимеразная цепная реакция) — это метод тестирования, который способен находить генетический материал вируса непосредственно в крови пациента, слюне или любой другой жидкости, изобретенный в 1983 году американским биохимиком Кэрри Муллисом.

Он основан на многократном копировании (амплификации) определенных участков вирусной ДНК в лабораторных условиях. По факту, чтобы «засечь» вирус в организме, с помощью специального фермента, собирающего из нуклеотидов по образцу вирусной ДНК ее копию, ученые дублируют фрагменты генетического материала вируса, пока их число не станет настолько большим, что будет возможно зафиксировать его присутствие с помощью флуоресцентных меток.

Как это работает?

Сначала вирусную ДНК выделяют из материала, представленного в лабораторию, денатурируют: на этом этапе двухцепочечную ДНК-матрицу нагревают до 94—96 °C, чтобы цепи ДНК разошлись. Затем добавляют так называемые праймеры — начальные звенья цепочки, которые необходимы для старта синтеза новой копии, и так называемую полимеразу — тот самый фермент, который и будет заниматься репликацией ДНК.

Схема: как ДНК-полимераза копирует каждую из цепочек ДНК по отдельности. РНК-праймер изображен белым прямоугольником в начале каждой из двух цепей

Как правило, для лабораторной ПЦР используются ДНК-полимеразы из термофильных бактерий, поскольку в течение реакции смесь многократно охлаждают и нагревают. На следующем этапе в смесь из ДНК, полимеразы и праймеров добавляются нуклеотиды — то есть строительный материал для воспроизводства, после чего емкость с нею нагревается до 37°C, и процесс запускается.

На последующей стадии элонгации полимераза начинает синтез на каждой из двух цепочек разделенной ДНК недостающей пары. Происходит это по принципу комплементарности: фермент присоединяет напротив каждого нуклеотида, из которых состоят ДНК, противоположный. По завершении реакции цикл неоднократно повторяется (см. видео ниже).

Общая схема полимераной цепной реакции. Цифрами обозначены ее этапы.

В случае с вирусами, содержащими не «двойную» ДНК молекулу, а «одинарную» РНК (а это коронавирусы, или, например, ВИЧ), ученым приходится сначала провести обратную транскрипцию РНК с помощью фермента обратной транскриптазы, а уже потом производить амплификацию по той схеме, что была указана выше. Именно так, собственно, поступает и сам вирус, попадая в клетку, перед тем как встроить свою ДНК в человеческую и приступить к синтезу собственных белков, из которых состоит его «тело» (то есть не генетического материала, а самих вирусных частиц, при ПЦР же, наоборот, копируется генетический материал, а не новые частицы вируса).

Ингибиторы обратной транскриптазы — одни из самых распространенных видов лекарств от ВИЧ-инфекции. К ним относятся, например, зидовудин и ламивудин — самые первые препараты АРВТ, разработанные еще в 80-х.

Производится ПЦР на специальных приборах, амплификаторах, или так называемых термоциклерах (Thermal cycler).

Наглядно, как работает метод ПЦР, можно посмотреть на приведенном ниже видео.

— Что касается ИФА-тестов для коронавируса, их разработать так и не успели?

— Почему? Тесты на определение антител к антигенам SARS-CoV-2 в крови существуют. У теста на антитела свои преимущества. Но я бы сказала так: они с ПЦР-тестом дополняют друг друга.

Тест на антитела лучше работает на поздних стадиях. Антитела в крови сохраняются и тогда, когда вирус исчезает из организма, то есть с помощью такого теста можно узнать, кто переболел COVID-19 в прошлом.

— Даже если у пациента не было выраженных симптомов и дело обошлось без госпитализации?

— А что за организации, кто в нашей стране занимается этими тестами? Роспотребнадзор?

— Роспотребнадзор — это очень обширная структура. Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор» в нее входит, он и разработал тесты, которыми пользуются в лабораториях Роспотребнадзора. То есть производит тесты «Вектор», а проводят тестирование региональные центры Роспотребнадзора.

Также на данный момент зарегистрирована тест-система от ФГБУ «Центр стратегического планирования и управления медико-биологическими рисками здоровью» Минздрава России (ЦСП).

У каждого теста есть погрешность. При низкой заболеваемости ложноположительных результатов может быть намного больше, чем выявленных реальных пациентов, даже если тест вполне хороший.

О разработке своих тестов заявили и некоторые другие организации — Научно-исследовательский институт микробиологии Минобороны РФ совместно с компанией СИНТОЛ, НИЦ эпидемиологии и микробиологии им. Н. Ф.

Гамалеи Минздрава России (НИЦ им. Н. Ф.

Гамалеи), компания «ДНК-технология». Производство собственных тест-систем планирует запустить Центр молекулярной диагностики CMD (ЦНИИ эпидемиологии Роспотребнадзора). И это хорошо, когда есть разные тест-системы, их можно сравнить, проверить результаты одной с помощью другой.

На первом заседании координационного совета по борьбе с коронавирусом вице-премьер РФ Татьяна Голикова сказала, что правительство ждет от регионов предложений о том, на базе каких еще лабораторий можно будет проводить эти исследования. Частные компании тоже смогут делать тесты на коронавирус на платной основе. Возможно, в самом скором времени будет новая информация о том, как все это будет происходить.

— На 15 марта появилась информация, что в России было произведено почти 110 тысяч тестов на коронавирус. Это много для наших масштабов или мало?

— По поводу возможности произвести достаточное количество тестов — тут много вопросов: производственные мощности, которыми мы располагаем, количество реагентов, которые понадобятся, наконец, лаборатории с необходимой техникой и обученным персоналом, где эти тесты проводить. Мало нам будет пользы и от миллиона тестов, если не хватит рук, чтобы эти тесты запускать. Все эти вопросы надо исследовать.

— Российских тестов несколько. В чем их принципиальные отличия? Почему государство выбрало именно те, что сделали в «Векторе»?

— Пока в России зарегистрировано три теста — два от «Вектора» и один от ЦСП. У тест-системы ЦСП чувствительность указана выше, есть внутренний контроль — РНК, которую добавляют в образец. Если эта РНК исчезнет в процессе, не даст сигнала, значит, что-то пошло не так.

Это знак, что могла исчезнуть и вирусная РНК, а стало быть, отрицательный результат следует считать ложноотрицательным. Про остальные тест-системы поговорим, когда они получат регистрационные удостоверения.

Почему государство выбрало именно «Вектор» для выполнения этого задания, мне неизвестно. Наверное, могли бы выбрать и, например, ЦНИИ эпидемиологии того же Роспотребнадзора. «Вектор» знаменит тем, что в нем работают с опасными патогенами, а «уханьский коронавирус» на тот момент выглядел очень пугающе: и по смертности среди заболевших, и по инфекционности были прямо страшные оценки.

Может быть, в этом причина, может быть, в чем-то другом, это надо узнавать у тех, кто принимал решение.

Когда необходимо сдавать ПЦР-тест

ПЦР-тестирование (также известное как тестирование полимеразной цепной реакции) — это тип лабораторного теста, который сообщает, есть ли у кого-то в настоящее время COVID-19. Этот тип диагностики обнаруживает присутствие вируса в организме. ПЦР не определяет время заражения, инфекционную нагрузку и стадию заболевания.

Необходимо пройти тест на определение новой коронавирусной инфекции в следующих ситуациях:

• При контакте с человеком, у которого ранее был диагностирован коронавирус.
• Недавно была совершена поездка в страну или регион, где число случаев заболевания находится на критическом уровне.
• Сотрудники, которые по своей профессии вынуждены общаться с карантинными регионами, должны пройти обязательное тестирование. Например, для доставки продуктов питания, обеспечения аптек лекарствами, обслуживания инженерных сетей, связи с торговыми точками.
• При наличии респираторных симптомов. Особенно важно обратиться к врачу, если температура тела повышена до 38 градусов.

Среди наиболее распространенных осложнений заболевания необходимо выделить вирусную пневмонию, острый респираторный дистресс-синдром с последующей острой дыхательной недостаточностью. При обнаружении следующих симптомов рекомендуется сдать анализ на определение COVID-19:

• Основным симптомом является любое (даже субфебрильное — 37-37,5 °С) повышение температуры тела.
• Кашель сухой или с небольшим количеством мокроты.
• Слабость.
• Потеря запаха и/или вкуса.
• Заложенность носа или легкая ринорея.
• Конъюнктивит.
• Боль в горле.
• Головная боль, головокружение.
• Мышечная боль.
• Головная боль.
• Боли в суставах и мышцах.
• Выраженная интоксикация организма.
• Диарея, тошнота, рвота.
• Озноб.
• Кровохарканье.
• Потеря аппетита.
• Заложенность грудной клетки, ощущение нехватки воздуха, отдышка.
• Насыщение крови кислородом по данным пульсоксиметрии (SpO2) ≤ 95%.

Некоторые группы населения подлежат тестированию на COVID-19:

• Госпитализированные пациенты с диагнозом Внебольничная пневмония.
  Сотрудники медицинских организаций, образовательных учреждений и т.д.
• Социальные работники и персонал домов престарелых.
• Медицинские работники, даже при отсутствии симптомов.

Как выглядит результат ПЦР-теста на коронавирус

Результаты исследования интерпретируются следующим образом:

• РНК SARS-CoV-2 не обнаружена: тест отрицательный — вируса в биоматериале нет;
• РНК SARS-CoV-2 обнаружена: тест положительный — инфекция в организме присутствует.

Если ПЦР-тест на выявление новой коронавирусной инфекции показал положительный результат:

Если у пациента отсутствуют симптомы и имеется нормальное самочувствие, то обнаружение РНК SARS-CoV-2 может указывать на наличие бессимптомного течения заболевания или на начальный период болезни. При положительном результате ПЦР-теста, независимо от наличия или отсутствия признаков заболевания, необходимо самоизоляция на протяжении 2 недель. Пациентам с бессимптомным течением коронавирусной инфекции назначается повторное исследование.

На начальной стадии развития инфекционного процесса, результат тестирование может быть — слабо положительным. Это может быть во время инкубационного периода, или на поздней стадии болезни. Ложноположительный результат вероятен, в случае несоблюдения транспортировки и хранения биоматериала.

Если ПЦР-тест на выявление новой коронавирусной инфекции показал отрицательный результат:

Данный результат исследования может указывать на два варианта: отсутствие COVID-19 в организме или нарушение во время сбора или сдачи образца тестирования. Невозможно не принять во внимание, что количество вируса может быть недостаточно для определения. Но подобные ошибки происходят в редких случаях, в случае возникновения сомнений у докторов, пациенту назначается повторное исследование спустя небольшой промежуток времени.

Повторный отрицательный результат тестирования указывает на отсутствие COVID-19. В противном случае, если повторный тест окажется положительным, это означает, что пациент заражен вирусом COVID-19 и необходимо начинать лечение.